Herramientas Analiticas -

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    12-Feb-2017

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vtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1HerramientasAnal.casEspectrofotometravtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1Espectrometra/Espectroscopa Estudiosparaobtenerlacuan.ficacindelespectroelectromagn.codeemisinvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1Espectrofotometravtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1EspectrovsEspectrogramaDinmicoconrespectodel.empohHp://faculty.irsc.edu/FACULTY/TFischer/bio%201%20files/absorp.on%20spectrum2.jpg hHp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/7/77/Spectrogram_iua.png/800pxSpectrogram_iua.pngEst.coconrespectoal.empovtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1EspectrohHp://www1.sura.org/2000/SURA_Electromagne.c_Spectrum_Full_Chart.jpgvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1TiposdeMolculas DNA RNA Protenas Cualquierotro.poqueabsorba(cercanoalavisible): Industriatex.l,pinturas,.nciones,impresoras,imprentasvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1ComposicindeunEspectrofotmetroFuenteUVFiltro Muestra Filtro Detectorvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1CalibracinoBlanco Antesdehacercualquiermedicin,se.enequecalibrarelespectrofotmetroalasmismaslongitudesdeondaquesevanausar Seusalamismasolucin(solvente)enlacubetasinmuestrayseajustalalecturaaCERO Seenjuagalacubeta,seagregalamuestraysehacelalecturavtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1MedicindeRNAyDNA Loscidosnuclicosabsorbenlamximaenergaen=260nm Protenasabsorbena=280nm Siseusanambas,sepuedencalculartantolaconcentracincomolapurezadecidosnuclicosvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1MedicindeRNAyDNA Absorbancia=Densidadp.ca(OD) 1Abs=1OD=50g/mLDNAcadenadoble(aprox.) 1Abs=1OD=40g/mLRNA/DNAcadenasencilla(aprox.) Pureza(contaminacinconprotenasyalgodefenolocloroformo)seob.eneconlarelacin: Abs260nm/Abs280nm~=[1.82] Entremasbajalarelacin,mscontaminacin.ene pHafecta,usarbuffers,pH~7.5vtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1MedicindeProtenas Tipicamentea=280nm Debidoa Fenilalanina Tirosina TriptfanoBiochemistryTheChemicalReac.onsOfLivingCells2dEdVols1&2DavidE.Metzlervtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1EjemplosClculodeConcentracindeRNA/DNA BeersLawA=bc AAbsorbancia AbsobabilidadMolar(L/cm) blongitud(cm) cConcentracin(mg/L) Ejemplo:Lecturaa260nmde0.422,deunadilucinde1:100deDNAc=0.422*50ug/ml=21.1ug/ml(encubeta)C=c*100=2.11mg/ml(ensolucin) 1Abs=50mg/L=50g/mldsDNA 1Abs=40mg/L=40g/mlssRNA 1Abs=33mg/L=33g/mlssDNA?MolecularDiagnos.csFundamentalsMethodsandClinicalApplica.onsBuckinghamFlawsDavishHp://www.bmglabtech.com/applica.onnotes/absorbance/absorbancednaquan.ta.on168.cfmvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1CurvasdeCalibracin Ayudana Lecturasconsistentes(aparato) Muestraconfiable Cubetaenbuenestado DetectarerroresdePipeteo DeterminacindeLINEARIDAD Determinacindelmejorlugarparamediryhacersolo1medicinenfuturosensayos Seob.eneconlecturasrepe.dasendilucionesseriadasvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1EjerciciodeClculodeCurvadeCalibracin Enequiposde45personas CalcularcorrelacinusandoExcelvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1Consideraciones Simplesin.nciones pHafecta Dejarcalentarelespectro,.picamente10a15minutos Lascubetasnodebenabsorveraladelectura. MezclasdeRNA/DNA/Protenas ParaconcentracionesPRECISASdeentre10y100ng/mL,fluorometraespreferida Calibraciones MantenimientoAnual,calibrandoconfiltrosconocidosentodoelrangodelongitudesdeonda, Rangolinealdelaparato,absorbancias.picamenteentre0.05y0.8(vermanualdelaparato)vtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1Espectrofotmetrosvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1EspectrofotmetrosNanodropvtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1OtrosTiposdeEspectrofotometra UV FTIR MASS? Par.cleSizevtrevino@itesm.mx BT2008Diagns.coMolecular1Tarea Amano,12cuar.llasmximo,paralasiguienteclase Queescromatogra{ay2aplicaciones